Nikon Laser TIRF System(Total Internal Reflection Fluorescence) 雷射全內反射螢光影像系統

TIRF完全內反射螢光影像系統利用光學全反射原理產生之漸逝波(Evanescent Wave),來激發貼近蓋玻片表面100nm以內的螢光物質。 
 
 

1. 物理現象

光線從折射率高介質穿過折射率相對低介質,當入射角度大於臨界值時,會產生完全反射回折射率高介質的現象;此時玻片表面產生漸逝波,離得愈遠,能量遞減愈快,所以只有在100nm內的螢光可被激發,有效降低非對焦面的背景訊號,進而得到戲劇性的高訊譟比影像。

2. 特製物鏡 

 Plan Apo TIRF 60x與Plan Apo TIRF 100x物鏡,具有超高解析度N.A. 1.49,並可手動調整溫度校正環,避免鏡油因溫度變化折射率改變所產生的球面像差;其中,100x物鏡更適合建構雷射光鉗系統(Laser Tweezers System)。

3. 細胞結構觀察

(a) 傳統螢光影像

(b) TIRF影像

(c) 兩種影像套色疊加

*Images courtesy of: Dr. Gregg G. Gundersen, Columbia University

4.單分子觀察

(a) 傳統螢光影像,可觀察細胞邊界

(b) TIRF影像,可動態追蹤單分子

Specimen: YFP-tagged neurotransimitter receptors expressed in dispersed hippocampal neurons in primary culture

Normal distribution
Molecular dynamics

*Images courtesy of : Dr. Chieko Nakada, Kyoto University , Co-researcher: Professor Shigeo Okabe,Tokyo Medical and Dental University



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